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葡萄糖在加热的有机酸中脱水后能与邻甲苯胺缩合成雪夫氏碱，后者呈青色或蓝绿色，其最高吸收峰为630nm，颜色深浅与葡萄糖含量成正比，经酶标仪与标准品进行对比求得葡萄糖含量。

• 特异性高，其测定结果为真糖值；
  
• 不受还原物质干扰；
  
• 无需去除血浆或血清中的蛋白质。

• 蒸馏水、PBS、生理盐水、三氯乙酸溶液(5%)
  
• EP管、96孔板、水浴锅、96孔板、酶标仪

• 待测样品如不能及时测定，应置于2～8℃保存，3天内稳定。
  
• 严重黄疸、溶血及乳糜样血清样品需先制备无蛋白血滤液，再进行检测。
  
• 邻甲苯胺显色液有腐蚀性，请小心操作，如出现结晶、沉淀，置于温水浴溶解即可。
  
• 沸水浴时沸水一定要盖过管内的液面，否则温度不均匀，影响显色。
  
• 此法受煮沸时间、比色时间、试剂存放时间等因素的影响，一般不宜以标准曲线法进行计算，应每次同时做标准管。
  
• 最终反应液如果出现浑浊，最常见原因是高脂血症，可向显色液加入一半量的异丙醇，充分混合，可溶解脂质消除浑浊，所测吸光度乘以1.5。
  
• 采用酶标仪未调零情况下，我司空白参考范围在0.03～0.05之间，5mmol/L标准参考范围在0.2～0.3之间，由于仪器设备、操作方法等不同，参考范围会有差异。
  
• 该试剂盒测定下限为0.1mmol/L，测定上限为50mmol/L；以肉眼观察，浓度≤0.6mmol/L几乎呈无色，浓度在0.7mmol/L即可显淡黄绿色，浓度≥3mmol/L可显青色，浓度≥20mmol/L可显墨绿色，一般情况下接近上限比接近下限更准确。
  
• 本法线性范围可达50mmol/L，如果样品葡萄糖浓度过高，结果可能呈假性降低，应用生理盐水或PBS等稀释后重测，结果乘以稀释倍数。
  
• 试剂开封后请尽快使用，以防影响后续实验效果。
  
• 本试剂盒仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。

• 样品处理：
  
  • 血清、血浆、脑脊液及清亮的胸腹水样品：从待测样本中分离出的血清或血浆不应有溶血，直接检测。
    
  • 细胞样品：
    
    • 取适量的细胞(一般推荐>10⁶以上)，1000g离心，弃上清，留取沉淀。
      
    • 用PBS或生理盐水清洗1～2次，1000g离心，弃上清，留取沉淀。
      
    • 加入200～300μL的PBS或生理盐水匀浆，冰浴条件下超声破碎细胞，功率300W，每次3~5s，间隔30s，重复3～5次；亦可手动匀浆，制备好的匀浆液不可离心，待用；亦可用1～2% Triton X-100冰浴，制备好的裂解液不可离心，待用。
  • 组织样品：准确称取适量组织样品，按质量(g)∶生理盐水或PBS(ml)=1∶9的比例，加入生理盐水或PBS，冰浴条件下手动或机械匀浆，2500～3000g离心，取上清。
    
  • 严重黄疸、溶血及乳糜样血清样品：需制备无蛋白血滤液，取血清0.2mL，加入1.8mL的三氯乙酸溶液(5%)，混匀，静置，离心，取上清。
• Glu加样：取EP管，按照下表设置系列孔，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡；如果样品浓度过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定，样品的检测最好能设置平行孔。
  
  • 血清、血浆、脑脊液及清亮的胸腹水、细胞样品、组织样品加样：
    

    加入试剂(μL)	空白孔	标准孔	测定孔
    蒸馏水	10	-	-
    Glu标准(5mmol/L)	-	10	-
    待测样品	-	-	10
    O-Toluidine显色液	500	500	500
    密闭，充分混匀，置于沸水浴中煮沸，取出在冷水中冷却。

  • 严重黄疸、溶血及乳糜样血清样品加样：
    

    加入试剂(μL)	空白孔	标准孔	测定孔
    三氯乙酸溶液(5%)	10	9	-
    Glu标准(5mmol/L)	-	1	-
    无蛋白血滤液	-	-	10
    O-Toluidine显色液	500	500	500
    密闭，充分混匀，置于沸水浴中煮沸，取出在冷水中冷却。

• Glu测定：取255μL加至96孔板，以空白孔调零，以酶标仪在630nm读取标准孔和各测定孔的吸光度。
  
• 计算：Glu(mmol/L)=A_测定/A_标准×5